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普通顯微鏡下EGFP原核表達(dá),擴(kuò)增質(zhì)粒致細(xì)菌變綠原因




來源:責(zé)任編輯:yiyi
時(shí)間:2011-6-21 9:26:22

本來這普通顯微鏡是無法看到熒光的所以導(dǎo)致,顯示結(jié)果原因有:

1)并不是說發(fā)光波長在可見光范圍就是可見的。熒光是需要光激發(fā)產(chǎn)生的(或是可見光,或是紫外,紅外光)。
由於螢光和激勵(lì)光相比,是非常微弱的,因此螢光顯微鏡的光源強(qiáng)度必須很高,即使在近紫外區(qū),
也必須有足夠的強(qiáng)度,為了滿足上述要求,通常採用高壓汞燈,但有時(shí)為了特殊需要,也採用氙燈或鹵素?zé)。?/P>

所以普通的顯微鏡光源不夠強(qiáng)
,這是其一,第二就是關(guān)于光學(xué)視野, 通常螢光的強(qiáng)度和激勵(lì)光相比,
是極微弱的(10-3 ~ 10-5 )如果螢光和激勵(lì)光相疊加,反差就會(huì)極度地減弱,因此,必須把激勵(lì)光和螢光徹底地分離出來。再此外,熒光易衰減,
熒光顯微鏡有相應(yīng)的設(shè)置減少其衰減。


2)是酵母污染所致!酵母孢子很頑固,需要整個(gè)環(huán)境通風(fēng)處理。在普通的生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室,細(xì)菌、酵母等常在一起操作,甚至用不著操作酵母,環(huán)境中的野生酵母孢子就可以產(chǎn)生這種結(jié)果,很典型。
如果產(chǎn)生噬菌體污染,將出現(xiàn)培養(yǎng)液先渾濁(細(xì)菌長起來了),然后很快變成清亮的現(xiàn)象。如果是在劃板培養(yǎng),會(huì)有噬菌斑現(xiàn)象。

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熒光顯微鏡使用的重要注意事項(xiàng)

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